Chlamydia trachomatis

Манзенюк И. Н., Воробьева М. С., Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов им. Л. А. Тарасевича.

Современные представления о возбудителе
Серодиагностка

Современные представления о возбудителе

Хламидиозы — группа инфекционных заболеваний антропонозной и зоонозной природы, вызывающих широкий спектр разнообразной патологии более чем у полумиллиарда человек по всему миру (рис. 1).

По оценке ВОЗ, среди заболеваний, передающихся половым путем, урогенитальный хламидиоз занимает второе место по частоте после трихомонадных инфекций. Более 90 миллионов новых случаев инфицирования С. trachomatis происходит ежегодно в мире, а экономический ущерб составляет миллиарды долларов [11, 12, 13, 25]. Россия не является исключением. Ежегодно сотни тысяч новых случаев заболевания, вызванных данным видом хламидий, регистрируются в Российской Федерации, в то же время многие случаи остаются нераспознанными из-за неполноценной диагностики, а в ряде случаев — при использовании некачественных диагностикумов.

Chlamydia trachomatis — облигатные внутриклеточные грамотрицательные неподвижные бактерии — причина трахомы, болезней, передающихся половым путем, некоторых форм артритов, конъюктивитов и пневмоний у новорожденных. Кроме того, инфицирование С. trachomatis увеличивает риск проникновения ВИЧ-инфекции [4].

Рис. 1. Местная хламидийная колонизация слизистых.

Хламидии метаболически неактивны по своей способности синтезировать АТФ и для жизнедеятельности используют экзогенные источники энергии. Они обладают уникальным двустадийным (бифазным) циклом развития: инфекционная форма (элементарные тельца) путем эндоцитоза попадает в эукариотические клетки, в которых остается в виде цитоплазматических включений, трансформируясь в вегетативную форму (репродуктивные тельца) и размножаясь путем бинарного деления [10]. При благоприятных условиях репродуктивный цикл завершается в течение 48-72 часов.

Рис. 2. Цикл размножения хламидий.

При наличии неблагоприятных для хламидий факторов этот период развития может достаточно растянуться (рис. 2).

Таксономическая классификация хламидий основывается на ограниченных фенотипических, морфологических и генетических критериях. Она не учитывает современных достижений в области генетики хламидий, таких как полный сиквенс генома С. trachomatis, анализ рибосомального оперона и открытие облигатных внутриклеточных микроорганизмов, имеющих схожий с хламидиями цикл развития. Фундаментальные исследования в области систематики хламидий [1, 27, 28], позволили уточнить таксономическое положение ряда представителей порядка Chlamydiales и предложить новую классификацию хламидий.

Таблица 1. Современная классификация хламидий.

Поря-док	Chlamydiales
Семей-ства	Chlamy- diacea	Chlamydophila	Parachlamy- deacea	Simka- niaceae	Waddli- aceae
Род	Chlamidia trachomatis	Chlamydophila pecorum	Parachlamy- deacea acanthamoebae	Simikania negevenis	Waddliaceae chondrophila
Виды	Chlamidia suis	Chlamydophila pneumonia
	Chlamidia muridarum	Chlamydophila psittaci
		Chlamydophila abortus
		Chlamydophila caviae
		Chlamydophila felis

Из данных, представленных в таблице 1, видно, что были внесены поправки в семейство Chlamydiaceae, которое теперь включает два рода: собственно Chlamydia и новый род Chlamydophila; в последний перешли виды Chlamydia pecorum, Chlamydia pneumonia и Chlamydia psittaci. Род Chlamydia включает, кроме Chlamydia trachomatis, два новых вида: Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Chlamydia muridarum изолирован от мышей и золотистых хомячков [3,4], Chlamydia suis — от свиней [5].

Все представители данного рода имеют гомологию по 16S и 23S рРНК гена более 97%. Чтобы быть включенным в этот род новым изолятам, необходимо иметь гомологию по 16S и 23S рРНК гену не менее 95% с типовым штаммом А/Наr13^T. Штаммы С.trachomatis имеют высокую степень гомологии нуклеотидных последовательностей, а по 16S рРНК гену различия составляют менее 0,65%. Для дифференциации и идентификации штаммов С. trachomatis друг от друга и от других видов используют вариабельные области в рибосомальных последовательностях ДНК, спейсорную область 16S-23S рРНК генов или ген МОМР белка, ompA1 (omp1) [8]. Размер генома хламидий 1,0-1,1 Mbr, что несколько меньше, чем геном представителей рода Chlamydophila. Полный сиквенс генома С. trachomatis выявил 1042519 пар нуклеотидов, которые объединяются в 894 гена, кодирующих белки, причем функция 255 до сих пор неизвестна [14]. Большинство штаммов рода Chlamydia имеют экстрахромосомную ДНК - плазмиду (рСТ) размером около 7,5 т.п.н, но не все.

Хламидийные виды продуцируют гликоген, который легко детектируется в человеческих сероварах С. trachomatis и в различных количествах — в С. muridarum и С. suis [6]. Штаммы, входящие в данный род, имеют различия в морфологии включений и в уровнях чувствительности к сульфадиазину.

С. trachomatis первоначально включал два человеческих биовара и мышиный биовар [2]. После уточнения в таксономии только штаммы человеческих биоваров остаются в С. trachomatis [7]. 18 сероваров включено в два биовара: трахома и лимфогранулема (LGV) [9]. Эти серовары узнаются специфическими антителами и могут различаться по оmрА - последовательностям. В биовар трахома в настоящее время включено 14 сероваров от А до К плюс Ва, Da, la. Серовары А-С связывают с эндемической трахомой, а серовары D-K — с заболеваниями, передающимися половым путем. LGV-биовар содержит четыре серовара — LI, L2, L2а и L3. LGV - серовары передаются половым путем и вовлекают лимфатическую ткань. В настоящее время имеется четкое разделение обоих биоваров друг от друга, основанное на патогенности и на росте их в клеточной культуре и в лабораторных животных, однако не разработана четкая система генетической дифференцировки LGV-биовара от биовара трахомы. В настоящее время делаются попытки определения молекулярных критериев различия этих микроорганизмов. Референс-штаммом для LGV-биовара является L2/434/BU (ATCC VR 902B),a референс-штаммом для биовара трахомы — С/РК-2.

 

Серодиагностика

Выраженный полиморфизм клинических проявлений значительно осложняет клиническую диагностику хламидиозов. Решающее значение в выявлении хламидийных инфекций принадлежит методам лабораторной диагностики, которые включают в себя и данные серологии (обнаружение различных классов антихламидийных антител). В то же время необходимо учитывать, что серологические методы имеют второстепенное значение в диагностике острой хламидийной инфекции из-за невысоких уровней антихламидийных антител. Но они успешно используются при тяжелых воспалительных заболеваниях урогенитальной сферы, в установлении диагноза персистирующей, бессимптомной, вялотекущей инфекции или хронических последствий заболеваний, вызванных С. trachomatis (осложнений, возникающих в результате восходящей инфекции), когда другие методы лабораторной диагностики неэффективны и не позволяют выявить антигены, или ДНК С. trachomatis, или живые микроорганизмы [12, 18]. В таких случаях серологический анализ дает исчерпывающий ответ, снижая возможность ложной интерпретации отрицательных результатов лабораторного анализа при прямом определении антигена или ДНК. Данный метод уменьшает необходимость использования инвазивных процедур, которые требуются для прямого детектирования антигена, ДНК/РНК возбудителя, и, соответственно, проблемы, связанные с техникой взятия образца (эффективности соскоба) и его транспортировки. Использование серологических методов исследования наиболее актуально при лабораторном обследовании больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ), так как серодиагностика более часто выявляет наличие инфекционного процесса, вызванного С. trachomatis, по сравнению с ПЦР или культуральным методом при использовании образцов, полученных из шейки матки и уретры.

Наличие видоспецифических антихламидийных антител пятикратно повышает риск возникновения внематочной беременности [32]. Исследования наличия МОМР-белка С. trachomatis в тканевых образцах маточных труб у бесплодных женщин с гистологически подтвержденным хроническим сальпингитом и/или трубной непроходимостью показали, что уровень видоспецифических антител класса G к С. trachomatis значительно выше у пациентов, у которых специфический антиген был обнаружен, чем в случаях, когда он не выявлялся. Распространение и уровни антител класса А отмечены на более высоких значениях при ВЗОМТ, чем у пациентов с бесплодием, обусловленным трубной непроходимостью. Это может свидетельствовать о более остром течении хламидийной инфекции у пациентов с ВЗОМТ. Кроме того, отмечены более высокие уровни видоспецифических антител класса G у пациентов с бесплодием, вызванным трубной непроходимостью, чем у пациентов с другим генезом бесплодия [21,34], а также у больных реактивными артритами [15]. Антитела к возбудителю определяются более чем у 50% женщин с обтурацией маточных труб. Необходимо учитывать, что более 50% случаев воспаления придатков вызвано С. trachomatis [26].

Все это свидетельствует о предпочтительности проведения серологического исследования у больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза [16,20]. Видоспецифическая диагностика антител к С. trachomatis применяется для исключения хронической формы этой инфекции у женщин с ВЗОМТ и бесплодием. Не менее важна она для установления причин реактивного артрита [30]. Определение IgG к МОМР-белку в синовиальной жидкости успешно используется для диагностики реактивного артрита, вызванного С. trachomatis [15].

Современным направлением в лабораторной диагностике инфекций, вызванных С. trachomatis, становится комплексный подход при использовании комбинации различных диагностических тестов для скрининга и подтверждения. Серологическое исследование посредством определения видоспецифических антител к С. trachomatis является достаточно эффективным методом диагностики, особенно при инфекциях верхних отделов урогенитального тракта. Метод позволяет охарактеризовать присутствие инфекции, ее стадию и назначить соответствующее лечение.

Характеристика гуморального ответа

Иммунологический ответ при хламидиозах еще недостаточно изучен. Известно, что развитие хламидийной инфекции активирует защитные механизмы организма человека: индукция секреторного IgA, цитотоксическое действие Т-клеток и гуморальный ответ путем выработки различных классов антител. Последовательная динамика появления различных классов антител — М, A, G — позволяет поставить точный серологический диагноз хламидийной инфекции.

Наработка антител к антигенам хламидий происходит на стадии элементарных телец, когда хламидийные клетки находятся в межклеточном пространстве и доступны для контакта с иммунокомпетентными клетками организма. Хламидии поглощаются периферическими моноцитами, распространяются и оседают в различных органах и тканях организма человека, сохраняясь там в течение длительного периода времени, что, как правило, приводит к развитию восходящей персистирующей формы инфекции, которая обуславливает хроническое течение болезни. При этом время от времени происходит высвобождение антигенов хламидий из клеток, что приводит к индуцированию гуморального ответа. Известно, что возбудитель или его антигенные или нуклеиновые компоненты могут не выявляться в воротах первоначальной инфекции. Заболевание приобретает системный характер (рис. 3).

Рис. 3. Системное распределение возбудителей.

Сами хламидии — слабые иммуногены, поэтому титры антител при хламидиозах относительно невысоки. О сроках появления антител к основным белкам хламидий известно пока очень мало. В промежутке между 1-й и 3-й неделями после проявления первых симптомов болезни последовательно возникают родоспецифические антитела М, A, G, а в ряде случаев их удается определить в этот период одновременно.

IgM антитела в сыворотке пациентов являются ранним маркером инфекции, появляются первыми при иммунологическом ответе макроорганизма, инфицированного хламидиями. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после начала заболевания. Наличие специфических IgM свидетельствует о развитии острой фазы хламидийной инфекции. Основное количество IgM сосредоточено в сосудистом русле. Период полураспада составляет 5 дней. Они нарабатываются против специфического хламидийного липополисахарида как наиболее сильного антигенного раздражителя иммунной системы, обладающего родоспецифическими функциями и стимулирующего антителогенез уже на ранней стадии инфицирования организма человека. Пик IgM приходится на 1-2-ю неделю. Затем происходит снижение титра антител. Как правило, IgM полностью исчезают через 2-3 месяца независимо от проведенного лечения. Эти антитела присутствуют только при острой фазе заболевания и не определяются при реинфекции. IgM оказывают стимулирующее влияние на синтез IgG. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой реинфекции (предыдущее инфицирование С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia)). Выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой).

IgA существуют в сывороточной и секреторной формах. Первая защитная реакция организма на инфекцию состоит в индукции секреторного IgA в местах проникновения инфекции. Вначале этот класс антител можно детектировать в семинальной и вагинальной жидкостях [23], в то же время отсутствует корреляция с содержанием сывороточного IgA [29]. В сыворотке антитела появляются через 10-14 дней после начала заболевания, обычно параллельно появлению G-антител, только на более низком уровне титров, и свидетельствуют о прогрессировании заболевания. Уровень IgA-антител обычно снижается к 2-4-му месяцу в результате успешного лечения. При реинфекциях их уровень вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это указывает на неэффективность лечения и формирование хронической формы инфекции. Таким образом, в диагностике хламидийной инфекции очень важно определение IgA-антител, так как они являются маркером как острой формы, так и манифестации при хронической форме инфекции. Наличие IgA свидетельствует об активации хламидийной инфекции. В течение короткого периода могут быть параллельно представлены IgM и IgA антитела. Определение специфических IgA более информативно в качестве маркера активной стадии хламидийной инфекции или в мониторинге эффективности лечения, так как эти антитела короткоживущие (5-8 дней) и имеют небольшой период полураспада. В это же время или с небольшой задержкой могут быть определены антитела класса IgG.

IgG — доминирующий класс иммуноглобулинов в сыворотке крови, составляющий до 90% всех антител. Около 48% его количества находится вне кровеносного русла, проходит через плацентарный барьер. Период полураспада — 23 дня. Аффинитет IgG к антигенным детерминантам хламидий повышается по мере развития иммунного ответа. IgG-антитела определяются через 15-20 дней после начала заболевания. Их наличие отражает более общую картину позитивного иммунного ответа в случаях текущей, хронической или перенесенной инфекции. В последнем случае IgG могут определяться на низком уровне в течение многих лет. В случае если происходит реинфекция или реактивация, наблюдается заметное увеличение уровня IgG (бустер-эффект), который у нелеченных пациентов сохраняется на неизменном уровне. Высокие уровни антихламидийных IgG диагностически важны при хронических или системных инфекциях: сальпингиты, механическая инфертильность, перигепатиты, эпидимиты, синдром Рейтера и пневмонии.

Хроническое течение хламидийной инфекции характеризуется наличием в крови пациентов IgA и IgG, уровни которых меняются незначительно в противоположность острой инфекции. Иногда при таком течении инфекции в течение 1-2 недель могут регистрироваться единичные IgA при недетектируемом уровне IgG. Обнаружение невысоких постоянных уровней lgA-антител в течение длительного периода времени может свидетельствовать о персистенции возбудителя при полном отсутствии симптоматики у пациентов. При лечении осложнений, вызванных восходящей хламидийной инфекцией, определение IgA и IgG может обеспечивать контроль излеченности пациентов [32]. Выявление 2-3-кратного снижения уровня А и/или G антител при исследовании в парных сыворотках может свидетельствовать об успешно проведенной терапии. Использование в серодиагностике парных сывороток, полученных на разных стадиях инфекции, может быть полезным, так как 2-4-кратная сероконверсия (увеличение титра антител во второй сыворотке по сравнению с первоначальной), свидетельствует об активной инфекции.

Динамика распределения видоспецифических антител к С. trachomatis в различных группах населения представлена в таблице 2.

 

Таблица 2. Мониторинг и распределение IgG и IgA к С. trachomatis в различных группах населения

Иммуноферментный анализ в серодиагностике хламидиозов

При серодиагностике хламидиозов используют следующие методы: реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) или микроиммунофлюоресценции (MIF-test), непрямой иммунопероксидазный анализ (IРА). Описание данных методов приведено в многочисленных зарубежных и отечественных публикациях.

Для серодиагностики хламидийных инфекций используют коммерческие ИФА-тест-системы, позволяющие выявлять родоспецифические или видоспецифические антитела различных классов. Иммуноферментные тест-системы, предназначенные для выявления родоспецифических антител, позволяют обнаруживать антитела классов IgM, IgA, IgG ко всем хламидиям. Тест-системы, сконструированные на основе видоспецифических белков или эпитопов С. trachomatis, позволяют определять видоспецифические антитела. В качестве антигенов для иммобилизации иммунологических планшетов при постановке ИФА на выявление родоспецифических антител к хламидиям используют очищенные лизаты клеток хламидий, наиболее часто из С. psittaci, или более высокоспецифичный рекомбинантный фрагмент хламидийного липополисахарида, не дающий перекреста с липосахаридами других грамотрицательных бактерий. В связи с этим тест-системы, основанные на использовании родоспецифического антигена хламидий, не дают информацию о том, каким видом хламидий вызвана инфекция, т. к. между различными видами могут наблюдаться перекрестные реакции. Известно, что более 70% населения имеют антитела к хламидиям, при этом большая доля (до 60-80%) людей имеют антитела к С. pneumonia (без клинической симптоматики), тогда как средние значения содержания антител к С. trachomatis составляют в популяции около 21%, сильно варьируя в различных группах населения [17].

В связи с этим при уточнении диагноза необходимо проводить межвидовую дифференцировку между С. trachomatis и С. pneumonia. Для дифференцировки между С. pneumonia и С. trachomatis требуются тесты, направленные на определение видоспецифических антител к тому или иному виду хламидий. При производстве видоспецифических тест-систем в качестве антигенов используют синтетические иммунодоминантные пептиды, соответствующие различным серотипам, которые не имеют гомологии с другими видами хламидий; рекомбинантные белки или очищенные элементарные тельца, специфичные для определенного вида хламидий.

Современные зарубежные тест-системы для определения видоспецифических антител к С. trachomatis разработаны на основе синтетических пептидов, являющихся зеркальным отражением видоспецифических иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка, что исключает возможность перекреста с другими видами хламидий (рис. 4).

Рис. 4. Структура клеточной стенки хламидии.

Использование синтетических пептидов иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка (основной белок наружной мембраны) в качестве антигенов в ИФА позволило существенно повысить чувствительность и специфичность разработанных коммерческих ИФА-тест-систем (фирм “Лаб-системc”, Финляндия; “Savyon Diagnostics Ltd”, Израиль; “Меdac”, Германия; “Meiji Milk Products Co., Ltd”, Япония) [18, 19]. При исследовании сывороток в данных тест-системах отсутствует перекрест с антителам и к С. pneumonia. Это особенно важно, т. к. с возрастом у абсолютного большинства людей выявляются антитела к С. pneumonia [36] в различных титрах, при этом отсутствуют клинические проявления. Использование иммуноферментных методов диагностики имеет большую ценность при установлении окончательного диагноза. Для выявления антител к С. trachomatis необходимо проводить определение IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA подтверждение осуществляется определением IgM. Определение только IgM недостаточно, так как отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Необходимо отметить, что ведущие зарубежные производители иммуноферментных тест-систем для серодиагностики хламидий не выпускают видоспецифические иммуноферментные тест-системы для выявления антител класса М к C.trachomtis. Работа по созданию таких ИФА-тест-систем проводится [29], но наталкивается на ряд проблем. Циркулирующий ревматоидный фактор (IgM анти IgG) обуславливает ложноположительные результаты. Кроме того, присутствие в сыворотках чрезмерных количеств специфических IgG может приводить к конкуренции с IgM за определенные антигенные эпитопы и быть причиной ложнонегативных результатов. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой инфекции из-за предыдущего инфицирования С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia).

В то же время выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой). Наиболее часто в таких случаях используют флуоресцентный метод определения видоспецифических антител данного класса или родоспецифический ELISA-тестдля обнаружения IgM.

Иммуноферментная тест-система для выявления видоспецифических

IgG к С. trachomatis “Хлами-IgG-ДС-Тг”

ЗАО “Медико-биологический союз” (МБС) совместно с НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ “Вектор”, 000 “Агробиомед” впервые в России разработали коммерческую тест-систему для выявления видоспецифических иммуноглобулинов G к С. trachomatis в сыворотке крови человека методом ИФА.

В процессе разработки тест-системы была проведена сравнительная оценка различных антигенов С. trachomatis отечественного производства. Показана перспективность применения в качестве сенсибилизирующего антигена для иммунологических планшетов видоспецифического рекомбинантного белка С. trachomatis (С-концевой фрагмент МОМР-белка С. trachomatis). Использование высокоочищенного видоспецифического рекомбинантного антигена позволило создать тест-систему “Хлами-IgG-ДС-Тг”, обладающую высокой чувствительностью и специфичностью. Показано отсутствие перекрестных реакций с антителами к С. psittaci и С. pneumonia.

Тест-система была аттестована в контролированном шифрованном клиническом опыте, проведенном сотрудниками ГИСК им. Л. А. Тарасевича на 180 сыворотках, полученных от больных с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы хламидийной этиологии, от больных людей с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы нехламидийной этиологии (пневмонии, бронхиты, ОРЗ, артриты, гепатиты В и С, нефриты, урогенитальные инфекции) и от здоровых людей без клинических жалоб.

Таблица 3. Результаты испытаний чувствительности и специфичности иммуноферментной тест-системы “Хлами-IgG-ДС-Tr” в сравнении с референс-тест-системой.

контингенты	Тест-система “Хлами-IgG-ДС-Tr”
	Абс.	В %
Опытная группа (чувствительность)
Положительные сыворотки от больных различными формами хламидиоза, вызванного C. trachomatis	58/60	96,7
Контрольная группа (специфичность)
Отрицательные сыворотки на IgG к C. trachomatis от здоровых доноров	59/60	98,3
Отрицательные сыворотки на IgG к C. trachomatis от больных с различной инфекционной и соматической патологией	57/60	95,0
Суммарная специфичность	116/120	96,7
Воспроизводимость	100

Анализ показателей чувствительности, специфичности и воспроизводимости испытываемой тест-системы в сравнении с референс-тест-системой (“Chlamydia trachomatis IgG EIA Test”, “Labsystems”, Финляндия) свидетельствует о высоких характеристиках тест-системы “Хлами-IgG-ДС-Тг”. Показатели чувствительности и специфичности данной тест-системы по отношению к референс-тест-системе составили 96.7 %, а воспроизводимость —100.0 %. Результаты представлены в таблице 3.

Данная тест-система обладает хорошими эксплуатационными характеристиками:

• удобна в использовании, проста и быстра в проведении реакции, позволяет одновременно тестировать до 96 образцов, включая контроли; время постановки реакции не превышает 2-х часов;
• стабильна, что обеспечивает объективные и клинически достоверные результаты при тестировании образцов в течение всего периода годности тест-системы;
• наличие цветовой реакции при внесении образцов исключает ошибки при постановке реакции, а наличие стрипированного планшета дает возможность ставить реакции по мере поступления образцов;
• безопасна, т. к. для конструирования тест-системы использован неинфекционный специфический рекомбинантный антиген и инактивированные сыворотки для формирования контрольных образцов;

• имеет низкую стоимость в сравнении с импортными аналогами.

Таким образом, проведенные исследования показали, что тест-система “Хлами-IgG–ДС-Тг” фирмы “МБС” по своей специфичности, чувствительности и воспроизводимости, т. е. по диагностической эффективности не уступает зарубежной коммерческой тест-системе (“Chlamydia trachomatis IgG ElA Test” — “Labsystems”, Финляндия) и была рекомендована Комитетом медицинских и иммунобиологических препаратов для серологической диагностики инфекций, вызванных С. trachomatis, в практической медицине.

Некоторые выводы

Выбор метода диагностики зависит от клинической формы хламидийной инфекции. Необходимо учитывать, что отдельный серологический тест не может быть использован для цели конечной диагностики, но исследование парных сывороток в динамике позволяет установить острую, хроническую стадии, реинфекцию или перенесенную инфекцию. Определение только одного класса антител не обеспечивает достоверность диагноза. При постановке окончательного диагноза инфекций, вызванных С. trachomatis, с использованием серологических методов анализа необходимо проводить определение IgA и IgG одновременно. Только тогда можно интерпретировать результаты анализа. Наличие невысоких уровней IgG в сыворотке человека может свидетельствовать о ранее перенесенной инфекции, проведенной терапии антибиотиками и т. д. из-за длительного — до 3-6 месяцев — сохранения антител в крови. Четкое нарастание IgG в парных сыворотках (в 3-4 раза от первоначального уровня) свидетельствует об активном течении текущей хламидийной инфекции. В этом случае необходимо параллельное исследование на IgA. Высокий уровень IgA подтвердит активное течение хламидийной инфекции или рецидив хламидиоза.

Таблица 4. интерпретация результатов выявления антител к C. trachomatis.

IgG	IgA	Интерпретация результатов
¾	¾	Отрицательный результат или чувствительность данной тест-системы ниже детектируемого уровня антител (образцы сыворотки взяты слишком рано после инфицирования). В последнем случае, если есть подозрение на хламидийную инфекцию, необходимо через 2-3 недели взять второй образец сыворотки и протестировать параллельно с первым.
+	¾ или ± *	Указывает на прошедшую или текущую инфекцию.
±	±	Присутствие или отсутсвие детектируемых уровней антител класс G и А к C. trachomatis не может быть определено, значения оптических плотностей лежат в “серой зоне”. Необходимо исследовать новый образец сывортоки через 14-21 день, сравнивая уровни антител в парных сыворотках. Повторный ± результат расценивают как отрицательный.
+	+	Может указывать на острую или хроническую инфекцию.
¾	+	Может указывать на острую или хроническую инфекцию.

Примечание * : ± - “серая зона”

Эффективная диагностика хламидийных инфекций включает комплекс методов по определению возбудителей и антител. Ранняя и правильная постановка диагноза очень важна для дальнейшего лечения. Нераспознанная и, соответственно, недолеченная хламидийная инфекция часто переходит в хроническую форму. Антитела при наличии инфекции определяются на очень ранней стадии, что позволяет назначить своевременное лечение. После проведения терапии, чтобы предотвратить повторные воспалительные процессы, вызванные имеющимися возбудителями, необходимо провести контроль — повторно определить титр антител (см. таблицу 4).

Иммуноферментный метод полезен для диагностики осложненных и хронических хламидийных инфекций. Наличие удобной системы интерпретации результатов, предложенной в инструкции по применению “Хлами-IgG-ДС-Тг”, позволяет более правильно поставить диагноз и назначить соответствующее лечение.

Стандартная панель сывороток

Одним из подходов к созданию качественных иммуноферментных тест-систем является разработка и создание стандартных панелей сывороток, содержащих и не содержащих антитела различных классов и позволяющих контролировать качество диагностикумов, отбирать наиболее эффективные тест-системы и проводить оценку качества работ клинико-диагностических лабораторий при постановке серологических анализов. В связи с этим сыворотки, входящие в состав стандартных панелей, должны быть стабильны, обладать определенными физико-химическими свойствами и должны быть детально охарактеризованы в различных серологических тестах.

ЗАО “Медико-биологический союз” (“МБС”) совместно с ГИСК им. Л. А. Тарасевича разработали первую в России стандартную панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса G к С. trachomatis. При разработке и паспортизации стандартной панели сывороток на С. trachomatis были использованы тест-системы фирм “Лабсистемс” (Финляндия), “Medac” (Германия), “Savyon Diagnostics Ltd” (Израиль), разработанные на основе синтетических пептидов, а также отечественная тест-система “Хлами- IgG -ДС-Тг”, разработанная на рекомбинантных белках.

Для формирования стандартной панели сывороток был охарактеризован банк сывороток (100 образцов) объемом 100-140 мл каждая. Из изученного банка сывороток были отобраны 20 отрицательных сывороток, не содержащих видоспецифических IgG к С. trachomatis, и 16 положительных сывороток, содержащих видоспецифические IgG к С. trachomatis. Сыворотки характеризовали по физико-химическим свойствам, стабильности и специфической активности. На стандартную панель оформлен паспорт, в приложении к которому указаны показатели активности (значения ОП в о.е.) каждой сыворотки, полученные при постановке ИФА в четырех использованных тест-системах, а также разработано свидетельство. Показатели чувствительности и специфичности ИФА-тест-систем при постановке на стандартной панели сывороток должны составлять 100 %.

Кроме того, на основе этой панели фирма “МБС” сформировала квалификационную панель для потребителей, содержащую 4 отрицательные и 4 положительные сыворотки, позволяющую оценивать качество постановки иммуноферментного анализа в диагностических лабораториях.

Литература

1. Everett К. D. E., Bush R. В., Andersen A. A. Emended description of the order Chlamydiales, proposal of Parachlamydiaceae fam. nov. and Simkani-aceae fam. nov., each containing one monotypic genus, revised taxonomy of the family Chlamydiaceae, including a new genus and five species, and standards for the identification organisms // International Journal of Systematic bacteriology. 1999. 49, pp. 415-440.

2. Moulder J.W., Hatch Т. Petal. Genus Chlamydia. In Bergey"s manual of Systematic Bacteriology / Ed. by N. R. Krieg. Baltimore: Williams & Wilkins, 1984. Vol. 1, pp. 729-739.

3. Fox J. C., Stills H. F., Paster B. J. et al. Antigenic specificity and morfologic characteristics of Chlamydia trachomatis, strain SFPD, isolated from hamsters with proliferative ileitis // Lab. Anim. Sci. 1993. 43, pp. 405-410.

4. Nigg С. Unidentified virus which produces pneumonia and systemic infection in mice // Science. 1942. 95, pp. 49-50.

5. Szeredi L, Schiller 1., Sydler T. et al. Intestinal Chlamydia in finishing pigs// Vet. Pathology. 1996. 33, pp. 369-374.

6. Garrett A. J. Some properties of the polysaccharide from cell cultures infected with TRIG agent (Chlamydia trachomatis) // J. Gen. Microbiol. 1975. 90, pp. 133-139.

7. Lapage S. P., Sneath P. H. A., Lessel E. F. et al. International Code of Nomenclature of Bacteria (1990 Revision). Bacteriological Code. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1992.

8. Everett К. D. E., Andersen A. A. The ribosomal intergenic spacer and domain I of the 23S rRNA gene are phylogenetic markers for Chlamydia spp. Int // J. Syst. Bacteriol. 1997. 47, pp. 461-473.

9. Batteiger В. E. The major outer membrane protein of a single Chlamydia trachomatis serovar can posses more than one serovar-specific epitope // Infect Immun. 1996. 64, pp. 542-547.

10. Moulder J. W. Interaction ofchlamydiae and host cells in vitro // Microbol. Rev. 1991. 55, pp. 143-190.

11. Хламидиоз. Клиника, диагностика, лечение. Методические рекомендации. М., 1996. 22 с.

12. Black С. М. Current Methods of laboratory Diagnosis of Chlamydiatrachomatis infections // Clinical Microbiology Reviews. Jan 1997, pp. 160-184.

13. Кротов С. А., Кротова В. А., Юрьев С. Ю. Хламидиозы: эпидемиология, характеристика возбудителя, методы лабораторной диагностики, лечение генитального хламидиоза: Реферативное сообщение. Кольцове, 1997. 63 с.

14. Stephens R. S. et al. Genome Sequence of an obligate intracellular pathogen of humans: Chlamydia trachomatis // Science Jet 1998. V. 282, pp. 754-759.

15. Bas S., Vischer T. L. Chlamydia trachomatis antibody detection and diagnosis of reactive arthritis // Br. J. Rheumatol. 1998. Oct. 37(10), 1054-9.

16. Theunissen J. J., Minderhoud-Bassie W. et al. Chlamydia trachomatis — specific antibodies in patients with pelvic inflammatory disease: comparison with isolation in tissue culture or detection with polymerase chain reaction // Genitourin Med. 1994. Oct. 70 (5), 304-7.

17. Freidank М. H., Holtje М. et al. Prevalence of antibodies to Chlamydia pneumoniae and Chlamydia trachomatis in different populations. Abstracts of Proceedings of the 3rd Meeting of the European Society for Chlamydial Research. Vienna, Austria. 11-14 September 1996, 376.

18. Ouchi К., Hasegawa К., Maki R. et al. Evaluation of a synthetic peptide based species specific EIA kit for detection of antibodies to Chlamydia trachomatis with clinical specimens // Kansenshogaku Zasshi. 1998. Mar. 72(3), 249-57.

19. Koskiniemi М., Ammala P., Narvanen A. et al. Stillbirths and maternal antibodies to Chlamydia trachomatis. A new EIA test for serology // Acta Obstet Gynecol Scand. 1996. Aug. 75 (7), 657-61.

20. Dieterle S., Rummel C., Bader L W. et al. Presence of the major outer — membrane protein of Chlamydia trachomatis in patients with chronic salpingitis and salpingitis isthmica nodosa with tubal occlusion // Fertil Steril 1998. Oct. 70 (4), 774-6.

21. Paukku М., Narvanen A., Puolakkainen М. et al. Detection of Chlamydia trachomatis antibodies by 2 novel tests: rELISA and peptide EIA. // Int J STD AIDS. 1998. Oct. 9(10), 604-7.

22. Хламидийная инфекция. Особенности и диагностические возможности / Под ред. Гомберга М. А., Орловой О. Е. МЕДАК-Диагностика, 1999. С. 31.

23. Wolf H., Neubert U., Volkenandt М. et al. Detection of Chlamydia trachomatis in semen by antibody-enzyme immunoassay compared with polymerase chain reaction, antigen-enzyme immunoassay, and uretral cell culture // Fertil. Steril. 1994. Dec. 62 (6), pp. 1250-1254.

24. Ward М. Е. An update on the immunology of Chlamydial infection. Abstracts of Proceedings of the 3rd Meeting of the European Society for Chlamydial Research. Vienna, Austria. 11-14 September 1996, pp. 58-62.

25. Gerbase A. C., RowleyJ. Т., MertensT. Е. Global epidemiology of sexually transmitted diseases // Lancet. 1998. V. 351, pp. 2-4.

26. Chernesky М., Goeree R. et al. The impact on prevalence and costs of using the ligase chain reaction assay for diagnostic testing or screening young Canadian women for lower genital tract infection with Chlamydia trachomatis using a computer derived mathematical model // Chlamydial infections / R. S. Stephens et al. (eds.) Proceeding of the Ninth International Symposium of Human Chlamydial Infection. Napa Valley, California, USA, June 21-26,1998, pp. 607-610.

27. Rurangirwa F. R., Dilbeck P. M., Crawford T. В., McGuire T. С., McElwain T. F. Analysis of the 16S rRNA gene of microorganism WSU 86-1044 from an aborted bovine foetus reveals that it is a member of the order Chlamydiales: proposal of Waddliaceaefam. nov., Waddlia chondrophila gen. nov., sp. nov. // Int J. Syst. Bacteriol. 1999. Apr. 49, pp. 577-81.

28. Ossewaarde J. М., Meijer A. Molecular evidence for the existence of additional members of the order Chlamydiales // Microbiology. 1999. Feb. 145, pp. 411-7.

29. Poussin М., Fuentes V., Corbel C., Prin L, Eb F., Orfila J. Capture-ELISA: a new assay for the detection of immunoglobulin M isotype antibodies using Chlamydia trachomatis antigen // J. Immunol. Methods. 1997. May 12. 204(1), pp. 1-12.

30. Bas S., Cunningham Т., Kvien T. K., Glennas A., Melby K., Vischer T. L. The value of isotype determination of serum antibodies against Chlamydia for the diagnosis of Chlamydia reactive arthritis // Br. J. Rheumatol. 1996. Jun. 35(6), pp. 542-7.

31. Mittal A., Kapur S., Gupta S. Host immune response in chlamydial cervicitis // Br. J. Biomed Sci. 1996. Sep. 53(3), pp. 214-20.

32. Henry-Suchet J., Askienazy-Elbhar M., Thibon M., Revol C., Akue B. A. Post-therapeutic evolution of serum chlamydial antibody liters in women with acute salpingitis and tubal infertility// Fertil Steril. 1994. Aug. 62(2), pp. 296-304.

33. Moss T. R., Darougar S., Woodland R. M., Nathan M., Dines R. J., Cathrine 33 V. Antibodies to Chlamydia species in patients attending a genitourinary clinic and the impact of antibodies to C.pneumoniae and C.psittaci on the sensitivity and the specificity of C.trachomatis serology tests // Sex Transm Dis. 1993. Mar-Apr. 20(2), pp. 61-5.

34. Videla C., Carballal G., Kekiklian G., Juarez C., Gomez M. M., Filippo E., Garcia A. Chlamydia trachomatis and tubal obstruction sterility // Medicina (B Aires). 1994. 54(1), pp. 6-12.