КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 6, 2002 г.

Хламидии являются одним из наиболее распространенных в индустриально развитых странах мира возбудителей заболеваний, передаваемых половым путем. Они приводят к серьезным нарушениям здоровья, вызывая воспалительные заболевания органов малого таза с последующим развитием осложнений, включая бесплодие, эктопическую беременность, хронические абдоминальные боли и т. д. У 80% инфицированных женщин и 50% мужчин заболевание носит асимптоматический характер, из-за чего большое количество случаев не диагностируется (9. 10). Ежегодно в мире происходит более 90 миллионов новых случаев инфицирования С. Тrachomatis [4]. Данные по распространенности хламидийной инфекции в различных популяционных и возрастных группах населения представлены в табл. 1 и 2.

Иммуноферментный метод успешно используется в установлении диагноза заболеваний, вызванных С. trachomatis (11). При серологическом исследовании клинического образца видоспсцифичсскими ELlSA-тест-системами имеется возможность одновременно тестировать наличие IgA и IgG к С.trachomatis. Выявление IgA-антител особенно важно в серодиагностике хламидийной инфекции, так как данный класс антител является маркером, как острой формы, так и манифестации хронической формы инфекции [2, 3]. Известно, что в сыворотке крови данные антитела появляются уже через 10—14 дней после начала заболевания, обычно параллельно появлению lgG-антител, только в более низкой концентрации. Наличие IgA-антител одновременно с IgG-антителами может свидетельствовать о прогрессировании хронического заболевания или о персистенции возбудителя при полном отсутствии симптоматики у пациентов. Специфические IgA-антитела короткоживущие (5—8 дней), имеют небольшой период полураспада. Выявление их важно при мониторинге лечения: 2—3-ех кратное снижение концентрации IgA-антител указывает на успешно проведенную терапию. Если же концентрация IgA-антител не падает после проведенного курса, то это указывает на недостаточную эффективность лечения и вероятный переход инфекции в хроническую форму (5). Особенно важно выявление lgA-антител при манифестации хронической формы инфекции и реинфекциях, когда специфические IgM-антитела не детектируются, а IgG менее показательны из-за их длительного периода жизни. Для выявления lgA-антител методом иммуноферментного анализа (ИФА) в различных странах используют коммерческие тест-системы, разработанные на основе синтетических пептидов, производства фирм "Лабсистемс" (Финляндия), "Savyon Diagnostics Ltd" (Израиль), "Medac" (Германия) и др. [7, 8].

Настоящая работа посвящена апробации и изучению на клиническом материале первой отечественной иммуноферментной тест-системы для выявления IgA к С. trachomatis, разработанной ЗАО "Медико-Биологический Союз" совместно с НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ "Вектор".

Таблица 1

Мониторинг распределения IgG и IgA к С.trachomatis в различных группах населения (по данным зарубежной литературы)

Таблица 2

Мониторинг распределения IgG и IgA к С. trachomatis в различных возрастных группах населения (по данным зарубежной литературы)

Материалы и методы. В работе использовали экспериментально-производственные серии иммуноферментной тест-системы "Xлами-IgA-ДC-Tr", предназначенной для выявления видоспецифичсских антител класса А к С. trachomatis в сыворотке крови человека методом непрямого ИФА. Тест-система представляет собой многокомпонентный набор. Для получения иммуносорбента — основного компонента тест-системы — использовали очищенный видоспецифический рекомбинантный антиген основного белка наружной мембраны (МОМР — major outer membrane protein, или ОМР-1) [6]. Конъюгат — моноклональные антитела мыши к IgA человека (Fc-фрагменту), конъюгированные с пероксидаэой хрена.

При проведении исследования клинического материала использовали предоставленную фирмой “ЛАМЕС” референс-тест-систему “Clamydia trachomatis IgA pELISA medac” фирмы "”Medac” (Германия) (иммуноферментная тест-система на основе синтетических пептидов для выявления антител класса IgA к С. trachomatis). Материалом исследования служили 290 сывороток крови от больных хламидиозом и здоровых лиц, полученных в медицинских учреждениях Москвы.

Выявление антихламидийных антител проводили методом ИФА согласно прилагаемым к тест-системам инструкциям по применению. Статистическую обработку результатов проводили согласно рекомендациям И. П. Ашмарина и А. А. Воробьева [1].

Результаты и обсуждение. Предварительно все 290 сывороток крови больных и здоровых лиц были исследованы на референс-тест-системе фирмы "Mеdac". На основании полученных результатов с учетом клинического анамнеза среди этих сывороток были отобраны сыворотки, содержащие и не содержащие lgA-антитела к С. trachomatis, и сформированы опытная и контрольная группы для дальнейшего изучения.

Опытная группа (81 образец) сформирована из сывороток, содержащих специфические антитела класса А к С. trachomatis от больных острой или хронической формой хламидийной инфекции с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы, урогенитальными хламидиозами, воспалительными заболеваниями органов малого таза и осложнениями хламидийной инфекции (трубная непроходимость, бесплодие и т.д.), поражением суставов.

Контрольная группа (209 образцов) сформирована из отобранных референс-препаратом сывороток, не содержащих специфические антитела класса А, от больных людей с различными заражениями внутренних органов и мочеполовой системы нехламидийной этиологии (пневмонии, бронхиты, ОРЗ, артриты, гепатиты В и С, нефриты, урогенитальные инфекции нехламидийной этиологии), больных, у которых этиологическим фактором заболевания являются представители хламидий других видов, а также сыворотка от людей, перенесших инфекции, вызванные С. trachomatis (отрицательных на А-антитела, но положительных на G-антитела). В данную группу вошли также отрицательные сыворотки от здоровых людей без клинических жалоб.

Сыворотки опытной и контрольной групп до начала работ были зашифрованы и хранились при t -20^oС. Все 290 образцов сывороток исследовали в испытуемой иммуноферментной тест-системе "Хлами-IgА-ДС-Тг", серия № 08 (ТМБ) и серия № 09 (ОФД), в соответствии с инструкцией по применению. Опыты были проведены в период срока годности препаратов.

После проведения исследований сыворотки были расшифрованы и распределены на соответствующие группы для оценки чувствительности, специфичности и воспроизводимости. Вычисляли показатели чувствительности, специфичности, воспроизводимости в процентах для испытуемой тест-системы в сравнении с референс-тест-системой.

Из 81 опытного образца, содержащего по данным референс-тест-системы антитела класса А к С.trachomatis, при анализе их с помощью испытуемой тест-системы 8 образцов дали отрицательный результат. В абсолютном большинстве случаев эти 8 сывороток были в референс-тест-системе слабоположительными по показателям оптической плотности (ОП). Чувствительность испытуемой тест-системы по отношению к референс-тест-системе составила 90,1% (табл. 3).

Таблица 3

Результаты испытания чувствительности и специфичности иммуноферментной тест-системы "Хлами—1gА—ДС—Тг" на сыворотках, предварительно отобранных с помощью референс-тест-системы" "Chlamydia trachomatis IgA pELlSA mеdac" ("Mеdac", Германия)

Анализ сывороток, отрицательных по данным референс-тест-системы на наличие IgA к С. trachomatis, показал, что 9 сывороток из 209 образцов давали ложноположительные результаты, причем значения ОП лежали в зоне, близкой к критической ОП. Специфичность испытуемой тест-системы по отношению к референс-тест-системе составила 95,7%.

Воспроизводимость испытуемой тест-системы в обоих вариантах — с ТМБ и ОФД — составила 100%.

Заключение. Разработанная коллективом авторов тест-система "Хлами-lgA-ДС-Тг" обладает хорошими эксплуатационными характеристиками, удобна в использовании, исследование с помощью данной тест-системы занимает менее 2 ч., позволяет одновременно тестировать до 96 образцов, включая контрольные, наличие цветовой реакции при внесении образцов исключает ошибки при постановке анализа, наличие разборного планшета дает возможность ставить реакции по мере поступления образцов. Данные изучения стабильности тест-системы показали, что испытуемая тест-система стабильна при хранении и устойчива к перепадам температур.

Тест-система имеет низкую стоимость по сравнению с импортными аналогами.

Таким образом, проведенные исследования показали, что тест-система "Хлами-IgА-ДС-Тг" фирмы "Медико-Биологический Союз" по своей специфичности, чувствительности и воспроизводимости может быть рекомендована для выявления антител класса А к С. trachomatis в диагностической практике. Комбинация двух систем — испытуемой "Xлами-lgA-ДC-Tr" и ранее разработанной "Хлами-IgG-ДС-Тг" — является достаточно эффективным инструментом для проведения сероэпидемиологического мониторинга распространенности инфекций, вызванных С. trachomatis, у различных групп населения РФ.

На следующем этапе работы предполагается разработать критерии количественной оценки результатов анализа при выявлении антител классов G и А к С. trachomatis, чтобы осуществлять мониторинг течения и качества лечения хламидийных инфекций, а также изучить возможности использования тест-системы "Xлами-IgA-ДC-Tr" в диагностике секреторных IgA к С. trachomatis.

ЛИТЕРАТУРА

Поступила 20.10.2000

EVALUATION OF THE FIRST RUSSIAN ENZYME 1MMU-NOASSAY RECOMB1NANT TEST SYSTEM CHLAMY-1GA-DC-TR FOR DETECTING IGA TO CHLAMYDIA TRACHOMATIS. I. M. Manzenyuk, M. S. Vorobyova, N. M. Nikitynk, S. A. Fedosov, M. V. Losev

A test system for detecting species-specific class A antibodies to Chlamydia Trachomaiis, making use of recombinant chlamydial antigen, is developed in Russia for the first time. Its efficiency was demonstrated in blind clinical trials. The sensitivity, specificity, activity, and use of Chlamy-lgA-DC-Tr test system are not inferior to foreign analogs.

41